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4-1- Antibiogramme par la méthode de diffusion sur gélose :
Page suivante : 4-1-1- Liste des antibiotiques testés :Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
4-Méthodes d’étude de la sensibilité aux antibiotiques :
Après recherche et identification de Helicobacter pylori, nous procédons à l’étude de la sensibilité de la bactérie aux antibiotiques habituellement prescrits dans les pathologies gastriques qui lui sont liées. Helicobacter pylori présentant une résistance naturelle à l’acide nalidixique, nous testons cet antibiotique pour confirmer l’identification. Page suivante : 4-1- Antibiogramme par la méthode de diffusion […]
3-6-5- Résistance à l’acide nalidixique :
Cette résistance est appréciée par la méthode de diffusion sur gélose. (cf § 3-7) Page suivante : 4-Méthodes d’étude de la sensibilité aux antibiotiques :Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
3-6-4- Recherche de l’uréase :
– Déposer une goutte de milieu Urée-Indol sur une tablette en plastique blanc . – Prélever une colonie et la déposer dans la goutte de milieu Urée-Indol. En présence de l’enzyme, au bout de quelques minutes, le milieu passe du jaune-orangé au rose fushia. (Annexe) Page suivante : 3-6-5- Résistance à l’acide nalidixique :Retour au […]
3-6-3- Recherche de la catalase :
– Déposer une goutte d’eau oxygénée (H2O2) sur une lame propre. – Prélever une colonie avec une pipette Pasteur et déposer dans la goutte d’eau oxygénée. La présence de l’enzyme se traduit par le dégagement de bulles gazeuses. Page suivante : 3-6-4- Recherche de l’uréase :Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des […]
3-6-2- Recherche de la cytochrome oxydase :
– Humidifier un disque de diméthyl paraphényléne diamine, avec une goutte d’eau distillée. – Prélever une colonie et l’écraser sur le disque avec une pipette Pasteur. La présence d’une cytochrome oxydase se traduit par l’apparition d‘une coloration brun-noir sur le disque. Page suivante : 3-6-3- Recherche de la catalase : Retour au menu : Helicobacter […]
3-6-1- Réalisation d’un frottis coloré par la méthode de Gram :
Frottis : – Déposer une goutte d’eau distillée sur une lame propre, à l’aide d’une seringue ou d’une pipette Pasteur. – Prélever une colonie, la déposer dans la goutte d’eau et l’étaler en effectuant des mouvements circulaires, à l’aide d’une pipette Pasteur. – Sécher puis fixer au bec Bunsen. Coloration : – Recouvrir le frottis […]
3-6- Identification des cultures :
Les milieux ensemencés et mis à l’étuve à 37°C en atmosphère microaérophile, sont observés tous les deux jours pour détecter une éventuelle croissance de colonies suspectes : petites (environ 1mm de diamètre) et translucides. (Figure n°17) Figure n°17 : Helicobacter pylori en primo-culture (photo prise au laboratoire de bactériologie, de l’EPH Bologhine Ibn Ziri). L’identification […]
3-5-2- Incubation :
L’incubation se fait dans des jarres contenant des générateurs de microaérophilie (2 sachets par jarre). Ces dernières sont placées dans une étuve à 37°C pendant 2 à 15 jours. Page suivante : 3-6- Identification des cultures :Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
3-5-1- Ensemencement :
– Pipeter un fragment de biopsie et le déposer sur le milieu Colombia au sang frais avec supplément (prélablement coulé et incubé pendant 24 heures, à 37°C) – Ensemencer à l’aide d’une pipette en râteau en effectuant des mouvements circulaires sans toucher les bords de la boite de Pétri. Page suivante : 3-5-2- Incubation :Retour […]
3-5- Culture :
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3-4- Coloration de Gram :
Frottis : – Déposer une goutte d’eau distillée sur une lame propre, à l’aide d’une seringue ou d’une pipette Pasteur. – Pipeter un fragment de biopsie, le déposer dans la goutte d’eau et l’étaler en effectuant des mouvements circulaires, à l’aide d’une pipette Pasteur. – Laisser sécher la lame dans une boite de Pétri stérile […]
3-3- Observation microscopique à l’état frais :
– Essuyer une lame avec de l’alcool et flamber au bac Bunsen. – Déposer une goutte d’eau stérile à l’aide d’une seringue ou d’une pipette Pasteur sur la lame. – Pipeter un fragment de biopsie et déposer sur la lame. Observation au microscope photonique : – Déposer une lamelle sur la lame. – Déposer une […]
3-2-Réalisation du test rapide à l’urée :
– Déposer une goutte de milieu Urée-Indole sur une tablette en plastique blanc (permet d’apprécier le virage du milieu) – Pipeter un fragment de biopsie et le déposer dans la goutte de milieu Urée-Indole. En présence de l’uréase bactérienne, au bout de quelques minutes, le milieu passe du jaune-orangé au rose fushia. (Figure n°16) Figure […]
3-1- Broyage des biopsies :
– Essuyer une lame avec de l’alcool et flamber au bec Bunsen. – Mettre la lame dans une boite de Pétri stérile. – Prélever et jeter l’eau physiologique des tubes contenant les biopsies et la remplacer par du BHIB (Bouillon cœur-cervelle) – Pipeter les biopsies avec le BHIB et les déposer sur une lame. – […]
3- Méthodes de recherche et d’identification de Helicobacter pylori :
Les biopsies gastriques étant récoltées en salle d’endoscopie et immédiatement transportées au laboratoire, les prélèvements ne nécessitent pas de milieux de transport particuliers. Ils sont déposés, lors de l’endoscopie, dans des tubes à essai contenant uniquement de l’eau physiologique stérile. Une fois au laboratoire de bactériologie, nous soumettons les prélèvements à un examen direct comportant […]
2-6- Appareillage nécessaire :
– Etuve – Congélateur –50°C – Réfrigérateur – Bain-Marie – Microscope photonique – Vortex – Densitomètre – Bec Bunsen Page suivante : 3- Méthodes de recherche et d’identification de Helicobacter pylori :Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
2-5- Matériel pour la conservation :
– Pipette Pasteur (1mL) – Tube stérile – Poire en plastique – Portoir Milieux de base : – Gélose Columbia au sang cuit coulé en pente. Page suivante : 2-6- Appareillage nécessaire :Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
2-4- Matériel pour l’étude de la sensibilité :
– Boite de Pétri (90mm de diamètre) – Pipette Pasteur (1mL) – Ecouvillon stérile – Disques d’Antibiotiques – Pince stérile – Poire en plastique Milieux de base : – Milieux Mueller-Hinton (Annexe n°7) – Sang frais humain (groupe O rhésus +) Page suivante : 2-5- Matériel pour la conservation :Retour au menu : Helicobacter pylori […]
2-3- Matériel pour l’isolement, l’identification et l’incubation :
– Lame – Lamelle – Boite de Pétri (90mm de diamètre) – Pipette Pasteur (1mL) – Poire en plastique – Portoir Milieux de base : – Flacon de gélose Columbia (180ml) (Annexe n°4) – Sang frais humain (groupe O rhésus +) – Supplément sélectif pour Helicobacter pylori : Trimétoprime, Cefsulodine Vancomycine, Amphotéricine B (Oxoid) Réactifs […]
2-2- Matériel pour la réalisation du test rapide à l’urée :
– Milieux Urée-Indole – Pipette Pasteur (1mL) – Tablette en plastique blanc – Poire en plastique Page suivante : 2-3- Matériel pour l’isolement, l’identification et l’incubation :Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
2-1- Matériel pour le broyage des biopsies :
– Pipette Pasteur (1mL) – Bistouri – Porte bistouri – Boite de Pétri (90mm de diamètre) – Poire en plastique – Portoir – Alcool (70°) – Lames propres Page suivante : 2-2- Matériel pour la réalisation du test rapide à l’urée :Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à […]
2- Matériel non biologique :
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1- Matériel Biologique :
Les biopsies gastriques constituent le matériel biologique objet de notre étude. Celles-ci sont prélevées en salle d’endoscopie et sont acheminées au laboratoire de bactériologie dans un délai n’excédant pas 10 minutes. En règle générale, pour chaque patient, deux prélèvements sont effectués : une biopsie antrale (au niveau de l’antre) et une biopsie fundique (au niveau […]
II- Matériel et Méthodes
Notre travail est une étude prospective (février à mai 2011) portant sur la recherche de Helicobacter pylori , à partir de la culture de biopsies gastriques provenant de 38 patients suivis dans les services de médecine interne et de pédiatrie de l’hôpital Bologhine Ibn Ziri , adressés pour une endoscopie digestive haute. Page suivante : […]
9- Traitement : sensibilité aux antibiotiques :
Le traitement consiste en une trithérapie de 7 jours associant un inhibiteur puissant de l’acidité gastrique : l’IPP (inhibiteur de la pompe à protons) et deux antibiotiques, le plus souvent l’Amoxicilline et la Clarithromycine (macrolide) ou encore le Métronidazole, si possible guidé par l’antibiogramme. (Vilaichone et al.,2006) (Figure n°15) La bactérie est éradiquée dans plus […]
8-2- Méthodes non invasives (indirectes) :
Les méthodes indirectes ont l’avantage de ne pas nécessiter d’endoscopie et d’être des méthodes dites « globales », c’est-à-dire qui explorent la totalité de la muqueuse gastrique. Elles sont sensibles et spécifiques et permettent un suivi de l’infection. Cependant, elles ne permettent pas l’isolement des bactéries. – Test respiratoire à l’urée marquée : Cette méthode […]
8-1-Méthodes invasives (directes) :
Elles consistent à pratiquer plusieurs biopsies de la muqueuse antrale ou fundique au cours d’un examen endoscopique et à rechercher les bactéries dans ces prélèvements biopsiques. La mise en évidence des germes se fait par trois méthodes différentes, souvent combinées. En règle générale, trois biopsies sont examinées au laboratoire, chacune d’entre elle servant à réaliser […]
8- Diagnostic bactériologique :
Les méthodes de recherche de Helicobacter pylori sont classées en « invasives » ou « non invasives » selon qu’elles nécessitent ou non une fibroscopie gastro-duodénale. Page suivante : 8-1-Méthodes invasives (directes) : Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
7-Diagnostic histologique : Anatomo-pathologie :
L’examen anatomopathologique est pratiqué sur des coupes de biopsies gastriques colorées par coloration de Giemsa modifiée ou par la coloration argentique. Il permet, en plus de la détection de H.pylori, l’étude de l’état de la muqueuse et est indispensable au diagnostic, au typage, au grading et à la stadification des lésions associées à l’infection. La […]