3-6-1- Réalisation d’un frottis coloré par la méthode de Gram :

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Frottis :

– Déposer une goutte d’eau distillée sur une lame propre, à l’aide d’une seringue ou d’une pipette Pasteur.
– Prélever une colonie, la déposer dans la goutte d’eau et l’étaler en effectuant des mouvements circulaires, à l’aide d’une pipette Pasteur.
– Sécher puis fixer au bec Bunsen.

Coloration :

– Recouvrir le frottis de Violet de Gentiane. Laisser agir 1 minute. Rincer à l’eau.
– Verser le lugol. Laisser agir 1 minute 30. Rincer.
– Verser l’alcool (70°) goutte à goutte sur la lame jusqu’à recouvrir tout le frottis. Laisser agir 30 secondes, puis rincer.
– Recouvrir la lame de Fushine. Laisser agir 1 minute. Rincer. Sécher la lame.

Observation au microscope photonique :

– Déposer une goutte d’huile à immersion sur la lame.
– Observer à l’objectif x100.

L’observation d’un bacille de forme hélicoïdale, coloré en rose (Gram -), isolé ou en « banc de poissons », indique la présence de Helicobacter pylori.

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