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Annexe n° 3: Fiche de renseignements
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Annexe n°2 : Coloration argentique
Technique basée sur la capacité des membranes et parois cellulaires à s’imprégner d’argent. Elle permet d’épaissir le corps bactérien et de mieux le visualiser. Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
Annexe n°1 : Coloration de Giemsa.
Coloration qui repose sur l’action complémentaire de deux colorants neutres et sur l’affinité des éléments cellulaires pour les colorants acides ou basiques. Ces colorant neutres sont : -Le May-Grünwald, neutre, contenant un colorant acide, l’éosine , et un colorant basique, le bleu de méthylène. -Le Giemsa, neutre, contenant lui aussi de l’éosine , et un […]
Références Bibliographiques
– Amir Tidadini Z.C., 2003- Pathologies gastriques et infections à Helicobacter pylori : Thése pour l’obtention du diplôme de doctorat d’état en sciences médicales à la faculté de Médecine d’Alger. pp 13-34. – Bergey’s Manual of systematic bacteriology,2001. Deuxième édition. – Botuna Eleco E., 2003- Prévalence de l’infection à Helicobacter pylori en milieu rural québécois […]
Conclusion
Notre étude a permis de contribuer à la mise en place d’un poste de culture de Helicobacter pylori au sein du laboratoire central de biologie de l’hôpital Bologhine Ibn Ziri. Un protocole de recherche et d’étude de la sensibilité aux antibiotiques de cette bactérie a été élaboré. Sur 38 patients prélevés, ce dernier a permis […]
2-5- Résultats de l’étude de la CMI :
L’étude des CMI pour l’amoxicilline par E-test n’a pas pu être réalisée pour les raisons sus-citées. Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
2-4- Résultats des antibiogrammes :
Tableau XIII : Résultats des Antibiogrammes Sur les 10 souches isolées, seulement deux antibiogrammes ont pu être réalisés. En effet plusieurs difficultés ont été rencontrées : • Les repiquages successifs des souches avant réalisation de l’antibiogramme induisent l’apparition de formes coccoides non cultivables. • Dans certains cas, une suspension de 3 Mac Farland n’a pas […]
2-3- Résultats de la Culture :
Tableau XII : Pourcentage de positivité de la culture. On note un taux de positivité à la culture de 34,3% ce qui concorde avec le taux de positivité rapporté au nombre de patients (34,2%). Sur les 38 cas adressés, 13 souches ont été identifiées et seules 10 ont pu être isolées et purifiées (Figure n°26). […]
2-2- Résultats de l’examen direct :
Tableau XI : Positivité aux examens directs (N=70) On remarque que les taux de positivité aux différents examens directs sont nettement plus importants que ceux de la culture seule. Ceci s’explique par le fait que ces tests soient réalisés immédiatement après le prélèvement, sur des bactéries fraichement prélevées, non encore confrontées à des conditions défavorables […]
2-1-Répartition des résultats en fonction du site anatomique de prélèvement :
Tableau X : Répartition des résultats en fonction du site anatomique de prélèvement. Le tableau X nous montre qu’il n’y a pas de différence significative entre les taux de positivité, à la culture, des prélèvements antraux et fundiques. Néanmoins nous avons noté, durant notre étude, des cultures plus abondantes pour les prélèvements antraux. Ceci corrobore […]
2-Etude bactériologique :
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1-5-Traitement antérieur :
Tableau VIII : Proportions de patients traités et non traités D’après le tableau VIII, sur les 38 patients de notre étude, seuls 11 ont reçu un traitement d’éradication contre Helicobacter pylori. Sur les 13 patients positifs à Helicobacter pylori, 3 d’entre eux ont reçu un traitement antérieur d’éradication. Cet échec thérapeutique peut s’expliquer soit par […]
1-4- Répartition des résultats en fonction de la pathologie ayant motivée la recherche d’Helicobacter pylori :
Tableau VII : Association entre H.pylori et différents types de pathologies gastriques. Figure n°21 : Répartition des patients en fonction des pathologies ayant motivé la recherche de Helicobacter pylori. Dans notre étude, chez les patients positifs à Helicobacter pylori aucun cas de néoplasie, de lymphome, ou de maladie cœliaque n’a été retrouvé. En outre, certains […]
1-3- Répartition des résultats en fonction de l’âge :
Tableau VI: Répartition des résultats en fonction de l’âge (culture). Le tableau ci-dessus nous montre que la tranche d’âge la plus touchée par les infections à Helicobacter pylori est celle de [17-32] ans avec un taux de positivité de 30,7%, suivie par celle de [33-48] ans (23%). Ceci est probablement lié à l’âge d’apparition des […]
1-2-Répartition des résultats en fonction du sexe :
Tableau V : Répartition des résultats en fonction du sexe (culture). On note que le taux de positivité chez l’homme (40%) est supérieur à celui retrouvé chez la femme (30,4%). Cependant, de nombreuses études épidémiologiques rapportent que l’infection à Helicobacter pylori touche plus le sexe féminin (6éme colloque sur Helicobacter pylori, 2011). Ceci s’explique par […]
1-1-Répartition générale des résultats :
Tableau IV : Taux de positivité globale (culture) D’après le tableau IV, sur un total de 38 patients atteints de pathologies gastriques associées à Helicobacter pylori, 13 se sont avérés positifs après culture. Un patient est considéré positif à Helicobacter pylori lorsque la culture est positive. L’examen direct (test rapide à l’urée, états frais, coloration […]
1-Etude épidémiologique :
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III-Résultats et Discussion
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5- Méthode de conservation des souches :
La conservation des souches de Helicobacter pylori se fait sur milieu Columbia au sang cuit, coulé en pente dans des tubes à essai stériles. La gélose est ensemencée en stries à partir des colonies obtenues en primo-culture ou à partir des réisolements. Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées […]
4-2-4- Interprétation des résultats :
La CMI est lue au point d’intersection de l’ellipse et de la bande. Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
4-2-3- Incubation :
L’incubation se fait à l’étuve à 37°C pendant 72 heures en atmosphère microaérophile ( à condition que la croissance soit significative et que l’ellipse d’inhibition soit clairement visible). Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
4-2-2- Méthodologie :
La CMI est déterminée à partir du même inoculum bactérien, après inoculation par les mêmes méthodes et sur le même milieu que pour l’antibiogramme par méthode de diffusion sur gélose. Application des bandes (retirées du congélateur puis laissées à température ambiante) : – Déposer la bande de E-test® sur la gélose sèche à l’aide d’une […]
4-2-1- Définition :
Le système E-test® consiste en une bande plastique non poreuse calibrée par un gradient de concentration d’antibiotiques contenant 15 dilutions. Les concentrations prédéfinies sont immobilisées à la face opposée à l’échelle et représentent des valeurs de CMI (la CMI est définie comme étant la plus faible concentration d’antibiotiques inhibant en 72 heures la multiplication des […]
4-2- Détermination de la CMI (concentration minimale inhibitrice) pour l’Amoxicilline par E-test® :
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4-1-6- Interprétation des résultats :
La lecture est faite après une période minimale d’incubation de 72 heures. Si la croissance, à la surface de la gélose, est significative et que les zones d’inhibitions sont clairement visibles, on peut mesurer les rayons d’inhibitions à l’aide d’un pied à coulisse métallique (les disques ayant été déposés aux bords de la boite de […]
4-1-5- Incubation :
Incuber à l’étuve à 37°C deux à trois jours, en atmosphère microaérophile. Page suivante : 4-1-6- Interprétation des résultats :Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
4-1-4-Application des disques d’antibiotiques :
Les disques d’antibiotiques sont d’abord retirés du congélateur (-20°C), puis laissés à température ambiante. A l’aide d’une pince stérile, déposer les disques, un à un, sur la gélose ensemencée, à l’extrémité de la boite de Pétri. Pour une bonne lecture, déposer trois disques maximum par boite. Page suivante : 4-1-5- Incubation :Retour au menu : […]
4-1-3- Inoculation : (méthode par écouvillonnage ou méthode de KIRBY-BAUER)
– Plonger un écouvillon stérile dans l’inoculum et bien l’essorer sur les rebords du tube. – Frotter l’écouvillon sur la totalité de la surface gélosée d’un milieu Mueller- Hinton au sang frais, de haut en bas, en stries serrées. – Répéter l’opération deux fois en tournant la boîte de Pétri à 60°, à chaque fois. […]
4-1-2- Préparation de l’inoculum :
L’inoculum est préparé à partir de colonies viables fraîchement identifiées dans un tube à essai stérile contenant de l’au distillée. La turbidité est ajustée à l’aide d’un vortex et d’un densitomètre à 3 Mac Farland. Page suivante : 4-1-3- Inoculation : (méthode par écouvillonnage ou méthode de KIRBY-BAUER)Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude […]
4-1-1- Liste des antibiotiques testés :
– Amoxicilline – Ciprofloxacine – Tetracycline – Erythromycine – Acide nalidixique (caractère d’identification) Page suivante : 4-1-2- Préparation de l’inoculum : Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri