Recherche
3-5-2- Incubation :
L’incubation se fait dans des jarres contenant des générateurs de microaérophilie (2 sachets par jarre). Ces dernières sont placées dans une étuve à 37°C pendant 2 à 15 jours. Page suivante : 3-6- Identification des cultures :Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
3-6- Identification des cultures :
Les milieux ensemencés et mis à l’étuve à 37°C en atmosphère microaérophile, sont observés tous les deux jours pour détecter une éventuelle croissance de colonies suspectes : petites (environ 1mm de diamètre) et translucides. (Figure n°17) Figure n°17 : Helicobacter pylori en primo-culture (photo prise au laboratoire de bactériologie, de l’EPH Bologhine Ibn Ziri). L’identification […]
3-6-1- Réalisation d’un frottis coloré par la méthode de Gram :
Frottis : – Déposer une goutte d’eau distillée sur une lame propre, à l’aide d’une seringue ou d’une pipette Pasteur. – Prélever une colonie, la déposer dans la goutte d’eau et l’étaler en effectuant des mouvements circulaires, à l’aide d’une pipette Pasteur. – Sécher puis fixer au bec Bunsen. Coloration : – Recouvrir le frottis […]
3-6-2- Recherche de la cytochrome oxydase :
– Humidifier un disque de diméthyl paraphényléne diamine, avec une goutte d’eau distillée. – Prélever une colonie et l’écraser sur le disque avec une pipette Pasteur. La présence d’une cytochrome oxydase se traduit par l’apparition d‘une coloration brun-noir sur le disque. Page suivante : 3-6-3- Recherche de la catalase : Retour au menu : Helicobacter […]
3-6-3- Recherche de la catalase :
– Déposer une goutte d’eau oxygénée (H2O2) sur une lame propre. – Prélever une colonie avec une pipette Pasteur et déposer dans la goutte d’eau oxygénée. La présence de l’enzyme se traduit par le dégagement de bulles gazeuses. Page suivante : 3-6-4- Recherche de l’uréase :Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des […]
3-6-4- Recherche de l’uréase :
– Déposer une goutte de milieu Urée-Indol sur une tablette en plastique blanc . – Prélever une colonie et la déposer dans la goutte de milieu Urée-Indol. En présence de l’enzyme, au bout de quelques minutes, le milieu passe du jaune-orangé au rose fushia. (Annexe) Page suivante : 3-6-5- Résistance à l’acide nalidixique :Retour au […]
3-6-5- Résistance à l’acide nalidixique :
Cette résistance est appréciée par la méthode de diffusion sur gélose. (cf § 3-7) Page suivante : 4-Méthodes d’étude de la sensibilité aux antibiotiques :Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
4-Méthodes d’étude de la sensibilité aux antibiotiques :
Après recherche et identification de Helicobacter pylori, nous procédons à l’étude de la sensibilité de la bactérie aux antibiotiques habituellement prescrits dans les pathologies gastriques qui lui sont liées. Helicobacter pylori présentant une résistance naturelle à l’acide nalidixique, nous testons cet antibiotique pour confirmer l’identification. Page suivante : 4-1- Antibiogramme par la méthode de diffusion […]
4-1- Antibiogramme par la méthode de diffusion sur gélose :
Page suivante : 4-1-1- Liste des antibiotiques testés :Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
4-1-1- Liste des antibiotiques testés :
– Amoxicilline – Ciprofloxacine – Tetracycline – Erythromycine – Acide nalidixique (caractère d’identification) Page suivante : 4-1-2- Préparation de l’inoculum : Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
4-1-2- Préparation de l’inoculum :
L’inoculum est préparé à partir de colonies viables fraîchement identifiées dans un tube à essai stérile contenant de l’au distillée. La turbidité est ajustée à l’aide d’un vortex et d’un densitomètre à 3 Mac Farland. Page suivante : 4-1-3- Inoculation : (méthode par écouvillonnage ou méthode de KIRBY-BAUER)Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude […]
4-1-3- Inoculation : (méthode par écouvillonnage ou méthode de KIRBY-BAUER)
– Plonger un écouvillon stérile dans l’inoculum et bien l’essorer sur les rebords du tube. – Frotter l’écouvillon sur la totalité de la surface gélosée d’un milieu Mueller- Hinton au sang frais, de haut en bas, en stries serrées. – Répéter l’opération deux fois en tournant la boîte de Pétri à 60°, à chaque fois. […]
4-1-4-Application des disques d’antibiotiques :
Les disques d’antibiotiques sont d’abord retirés du congélateur (-20°C), puis laissés à température ambiante. A l’aide d’une pince stérile, déposer les disques, un à un, sur la gélose ensemencée, à l’extrémité de la boite de Pétri. Pour une bonne lecture, déposer trois disques maximum par boite. Page suivante : 4-1-5- Incubation :Retour au menu : […]
4-1-5- Incubation :
Incuber à l’étuve à 37°C deux à trois jours, en atmosphère microaérophile. Page suivante : 4-1-6- Interprétation des résultats :Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
4-1-6- Interprétation des résultats :
La lecture est faite après une période minimale d’incubation de 72 heures. Si la croissance, à la surface de la gélose, est significative et que les zones d’inhibitions sont clairement visibles, on peut mesurer les rayons d’inhibitions à l’aide d’un pied à coulisse métallique (les disques ayant été déposés aux bords de la boite de […]
4-2- Détermination de la CMI (concentration minimale inhibitrice) pour l’Amoxicilline par E-test® :
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4-2-1- Définition :
Le système E-test® consiste en une bande plastique non poreuse calibrée par un gradient de concentration d’antibiotiques contenant 15 dilutions. Les concentrations prédéfinies sont immobilisées à la face opposée à l’échelle et représentent des valeurs de CMI (la CMI est définie comme étant la plus faible concentration d’antibiotiques inhibant en 72 heures la multiplication des […]
4-2-2- Méthodologie :
La CMI est déterminée à partir du même inoculum bactérien, après inoculation par les mêmes méthodes et sur le même milieu que pour l’antibiogramme par méthode de diffusion sur gélose. Application des bandes (retirées du congélateur puis laissées à température ambiante) : – Déposer la bande de E-test® sur la gélose sèche à l’aide d’une […]
4-2-3- Incubation :
L’incubation se fait à l’étuve à 37°C pendant 72 heures en atmosphère microaérophile ( à condition que la croissance soit significative et que l’ellipse d’inhibition soit clairement visible). Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
4-2-4- Interprétation des résultats :
La CMI est lue au point d’intersection de l’ellipse et de la bande. Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées à l’Hôpital Bologhine Ibn Ziri
5- Méthode de conservation des souches :
La conservation des souches de Helicobacter pylori se fait sur milieu Columbia au sang cuit, coulé en pente dans des tubes à essai stériles. La gélose est ensemencée en stries à partir des colonies obtenues en primo-culture ou à partir des réisolements. Retour au menu : Helicobacter pylori : Etude bactériologique des premières souches isolées […]
III-Résultats et Discussion
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1-Etude épidémiologique :
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1-1-Répartition générale des résultats :
Tableau IV : Taux de positivité globale (culture) D’après le tableau IV, sur un total de 38 patients atteints de pathologies gastriques associées à Helicobacter pylori, 13 se sont avérés positifs après culture. Un patient est considéré positif à Helicobacter pylori lorsque la culture est positive. L’examen direct (test rapide à l’urée, états frais, coloration […]
1-2-Répartition des résultats en fonction du sexe :
Tableau V : Répartition des résultats en fonction du sexe (culture). On note que le taux de positivité chez l’homme (40%) est supérieur à celui retrouvé chez la femme (30,4%). Cependant, de nombreuses études épidémiologiques rapportent que l’infection à Helicobacter pylori touche plus le sexe féminin (6éme colloque sur Helicobacter pylori, 2011). Ceci s’explique par […]
1-3- Répartition des résultats en fonction de l’âge :
Tableau VI: Répartition des résultats en fonction de l’âge (culture). Le tableau ci-dessus nous montre que la tranche d’âge la plus touchée par les infections à Helicobacter pylori est celle de [17-32] ans avec un taux de positivité de 30,7%, suivie par celle de [33-48] ans (23%). Ceci est probablement lié à l’âge d’apparition des […]
1-4- Répartition des résultats en fonction de la pathologie ayant motivée la recherche d’Helicobacter pylori :
Tableau VII : Association entre H.pylori et différents types de pathologies gastriques. Figure n°21 : Répartition des patients en fonction des pathologies ayant motivé la recherche de Helicobacter pylori. Dans notre étude, chez les patients positifs à Helicobacter pylori aucun cas de néoplasie, de lymphome, ou de maladie cœliaque n’a été retrouvé. En outre, certains […]
1-5-Traitement antérieur :
Tableau VIII : Proportions de patients traités et non traités D’après le tableau VIII, sur les 38 patients de notre étude, seuls 11 ont reçu un traitement d’éradication contre Helicobacter pylori. Sur les 13 patients positifs à Helicobacter pylori, 3 d’entre eux ont reçu un traitement antérieur d’éradication. Cet échec thérapeutique peut s’expliquer soit par […]
2-Etude bactériologique :
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2-1-Répartition des résultats en fonction du site anatomique de prélèvement :
Tableau X : Répartition des résultats en fonction du site anatomique de prélèvement. Le tableau X nous montre qu’il n’y a pas de différence significative entre les taux de positivité, à la culture, des prélèvements antraux et fundiques. Néanmoins nous avons noté, durant notre étude, des cultures plus abondantes pour les prélèvements antraux. Ceci corrobore […]