5.3. METHODE

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- On met des lames célanisées à incubation pendant 24 heures à 40 °C ;
- On procède ensuite au déparaffinage ;
- On met 4 fois 5 minutes dans un bain de xylène ;
- Réhydratation 4 fois 5 mn dans un alcool 100° absolu ;
- On rince avec de l’eau distillé 2 fois 5 minutes ;
- On entame l’étape du démasquage antigénique : Dans cette étape le choix des solutions est
fait selon son PH : PH  6 dans le Micro onde
PH  9 dans le Bain Marie
- Le PH de la solution doit être concentré au 1/10ème ;
- Le récipient de la solution du démasquage doit être mis dans le bain Marie pendant 5 minutes
puis dans le Micro onde, puis on la refroidi pendant 20 minutes ;
- Utiliser l’Automate
- Blocage des peroxydases d’eau oxygéné à 10 volumes ; puis rinçage à l’eau distillée ;
- On laisse incuber pendant 10 minutes ; ensuite on rince avec deux bains : l’eau distillé en
premier puis le PBS ;
- On entame l’étape de l’Anticorps primaire ;
- On essuie les lames dans une chambre humide puis on les mets dans une solution de lavage à
10 volumes ;
- On met quelques gouttes de l’anticorps primaire ;
- On laisse incuber 2 heures pour fixation, puis on procède au rinçage avec deux bains de PBS
dilués au 1/10ème ;
- On ajoute l’Anticorps secondaire : la Biotine pendant 30 minutes, on rince au PBS, puis on
ajoute la Streptavidine pendant 20 minutes ;
- On met quelques gouttes de Chromogènes qu’on laisse pendant 1 heure. Ensuite on rince à
l’eau distillée ;
- On entame l’étape de la coloration avec « L’Hématoxyline de Mayer » pendant 5 minutes,
on rince à l’eau ammoniaquée, puis à l’eau distillée ;
- Pour le montage, on utilise l’Eukitt ou le Pharamount aqueux ;
- L’étape de La Lecture s’effectue par les médecins.

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