2.2.3.2- Mode opératoire

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2.2.3.2.1- Préparation des solutions « étalon » de paracétamol

Des solutions « étalon » de paracétamol de concentrations respectives de 0, 50, 100,
200 et 400mg/l, sont préparées en dissolvant du paracétamol pur dans du sérum blanc (sérum
d’une personne n’ayant pas consommé de paracétamol).
Figure 15 : Équations des réactions du paracétamol avec les ions nitrites et du 3-
nitro 4-hydroxyacétanilide produit avec les ions hydroxydes.

2.2.3.2.2- Préparation des échantillons

Les échantillons de sang sont centrifugés pour éliminer les cellules sanguines et le
paracétamol est dosé directement ensuite dans le sérum ainsi obtenu.

2.2.3.2.3- Préparation du mélange réactionnel et mesure de l’absorbance

Ajouter 2ml d’acide trichloracétique (100g/l) à 1ml de prise d’essai (sérum ou solution
« étalon ») puis mélanger et centrifuger pendant 5 minutes (1er mélange).
Dans un autre tube, ajouter 1ml d’acide chlorhydrique (6N) à deux 2ml de solution de
nitrite de sodium (100g/l) et mélanger (2ème mélange).
Ajouter 2ml du surnageant du premier mélange obtenu au second mélange, agiter et
laisser reposer pendants 2 à 3 minutes à la température ambiante.
Ajouter 2ml de solution de sulfamate d’ammonium (150g/l) goutte à goutte, pour
éliminer l’excès d’acide nitreux.
Ajouter 2ml de solution d’hydroxyde de sodium (6M), agiter rapidement pour éviter
d’éventuelles bulles de gaz.
Mesurer l’absorbance à 405nm par rapport au blanc préparé avec du sérum.

2.2.4- Détermination du bilan hépatique

Le bilan hépatique effectué consiste en le dosage dans le sérum des principaux
marqueurs moléculaires de lésions hépatiques, que sont les transaminases (ASAT et ALAT),
les phosphatases alcalines (PAL), la gamma glutamyl transférase (GGT), la bilirubine totale
(T-BIL) et la bilirubine directe (D-BIL).
La quantification de tous ces paramètres a été effectuée automatiquement en utilisant
le doseur Beckmann Coulter à système SYNCHRON CX-9 du Laboratoire Central de
Biochimie du CHU de Tizi-Ouzou (Figure 16).

Figure 16 Photographie du doseur Beckmann Coulter à système SYNCHRON CX-9 du Laboratoire Central de Biochimie du CHU de Tizi-Ouzou

Pour tous les paramètres, cet appareil mesure la variation de l’absorbance par rapport à
un blanc, à la suite d’une réaction en présence d’un réactif spécifique (Tableau I).
Les espèces chimiques produites lors de chaque réaction, absorbent chacune à une
longueur d’onde qui lui est spécifique (Tableau I).
Les principes de dosage de ces paramètres sont cités en annexe 1.

Tableau I Spécification des réactifs pour doseur Beckmann Coulter à système SYNCHRON CX-9

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